Tris-氯化銨紅細(xì)胞裂解液

【產(chǎn)品名稱】 ：Tris-氯化銨·紅細(xì)胞裂解液

【產(chǎn)品規(guī)格】 ：100ml /500ml

【儲(chǔ)存條件】 ：4℃

【有效期】 ：12個(gè)月

【產(chǎn)品簡(jiǎn)介】 ：

在生物科研領(lǐng)域，經(jīng)常需要去除紅細(xì)胞，去除紅細(xì)胞的方法有多種，如 ACK Lysis Buffer、Tris-氯化銨·紅細(xì)胞裂解液、Gey's Lysis Buffer。Tris-氯化銨·紅細(xì)胞裂解液(Tris-NH4Cl Red Blood Cell Lysis Buffer)，也稱為 Tris-NH4Cl Lysis Buffer，是一種從人、鼠 或其他哺乳動(dòng)物等體內(nèi)的組織樣品或血液中裂解并去除無核紅細(xì)胞的溶液，其主要有效成分為 NH4Cl。

Tris-NH4Cl Lysis Buffer 經(jīng)過優(yōu)化配方，在裂解無核紅細(xì)胞的同時(shí)幾乎不損傷淋巴細(xì)胞(Lymphocyte)或其它有細(xì)胞核的細(xì)胞。本裂解液經(jīng)過濾除菌，經(jīng)過 Tris-NH4Cl Lysis Buffer 處理過的血液或組織細(xì)胞樣品可以用于后續(xù)的細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞融合以及核酸或蛋白的提取及各種常規(guī)的分析和檢測(cè)。

本產(chǎn)品僅供科研實(shí)驗(yàn)用，不做其它用途！

【自備材料】 ：

胰蛋白酶、離心機(jī)、PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液、胎牛血清

【操作步驟】(僅供參考)：

(一)組織細(xì)胞樣本的常規(guī)操作

1、制備細(xì)胞懸液: 新鮮組織經(jīng)過胰蛋白酶或膠原酶等消化處理，通過適當(dāng)方法制備成細(xì)胞 懸液，離心棄上清。

2、裂解: 加入 3～5 倍細(xì)胞沉淀體積的 Tris-NH4Cl Lysis Buffer，輕柔吹打混勻，裂解 1～2min。本操作步驟在 4℃條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。

3、離心: 4℃，400～500g 離心 5min，棄紅色上清。如無低溫離心機(jī)，本步驟亦可在室溫下操作。

如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不完全，可以重復(fù)上述步驟 2 和步驟 3 各一次。

洗滌：根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求加入適量 PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，輕柔混勻重懸沉淀。4℃，400～500g 離心 2～3min，棄上清，該離心步驟亦可在室溫下操作。所加入的 PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液的量一般應(yīng)大于細(xì)胞沉淀體積的 5 倍以上。

如有必要，重復(fù)上述步驟 5 一次，共洗滌 1～2 次。

根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀，進(jìn)行計(jì)數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

(二)組織細(xì)胞樣本的快速操作(無需洗滌)

1、制備細(xì)胞懸液：新鮮組織經(jīng)過胰蛋白酶或膠原酶等消化處理，通過適當(dāng)方法制備成細(xì)胞懸液，離心棄上清。

2、裂解：加入細(xì)胞 5 倍細(xì)胞沉淀體積的 Tris-NH4Cl Lysis Buffer，輕柔吹打混勻，裂解 1～2min。本操作步驟在 4℃條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。

3、加入 15～20ml PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，輕柔混勻。

4、離心：4℃，400～500g 離心 5min，棄紅色上清，本離心步驟亦可在室溫下操作。

5、如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不完全，可以重復(fù)上述步驟 2～4 各一次。

6、根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀，進(jìn)行計(jì)數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

(三)血液樣本的常規(guī)操作

1、取新鮮抗凝血，400～500g 離心 5min，棄上清。

2、裂解: 加入 6～10 倍細(xì)胞沉淀體積的 Tris-NH4Cl Lysis Buffer，輕柔吹打混勻，裂解 1～5min。本操作步驟在 4℃條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。(特別提醒：對(duì)于鼠的血液，裂解 1～2min 已經(jīng)足夠，對(duì)于人的外周血，宜延長(zhǎng)裂解時(shí)間至 4～5min，并且裂解過程中輕輕搖動(dòng)以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解。)

3、離心: 4℃，400～500g 離心 5min，棄紅色上清。如無低溫離心機(jī)，本步驟亦可在室溫下操作。

4、如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不完全，可以重復(fù)上述步驟 2 和步驟 3 一次。

5、洗滌: 根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求加入適量 PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，輕柔混勻重懸沉淀。4℃，400～500g 離心 2～3min，棄上清，該離心步驟亦可在室溫下操作。所加入的PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液的量一般應(yīng)大于細(xì)胞沉淀體積的 5 倍以上。

6、根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀，進(jìn)行計(jì)數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

注意：對(duì)于微量或少量的血液樣本，可以不用第 1 步操作，可直接加入 10 倍血液體積的 Tris-NH4Cl Lysis Buffer 進(jìn)行第 2 步操作，并在 4℃或室溫裂解 4～15min。對(duì)于鼠的血液，裂解 4～5min 已經(jīng)足夠； 對(duì)于人的外周血，宜延長(zhǎng)裂解時(shí)間至 10min，但通常不宜超過 15min，并且裂解過程中宜適當(dāng)搖動(dòng)以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解。

(四)血液樣本的快速操作(無需洗滌)

1、新鮮抗凝血中加入10 倍體積的Tris-NH4Cl Lysis Buffer，輕輕吹打混勻，裂解4～15min。本操作步驟在 4℃條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。（特別提醒：對(duì)于鼠的血液，裂解4～5min 已經(jīng)足夠，對(duì)于人的外周血，宜延長(zhǎng)裂解時(shí)間至 10min，但通常不宜超過 15min，并且裂解過程中宜適當(dāng)搖動(dòng)以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解。）

2、加入 20～30ml PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，輕柔混勻。

3、400～500g 離心 5min，棄紅色上清。4℃離心效果更佳。

4、如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不完全，可以重復(fù)上述步驟 2 和步驟 3 一次。

5、根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀，進(jìn)行計(jì)數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

【注意事項(xiàng)】 ：

1、制備細(xì)胞懸液時(shí)應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要，不一定要制備成單細(xì)胞懸液。

2、后續(xù)試驗(yàn)如果是用于細(xì)胞培養(yǎng)，操作過程中應(yīng)注意無菌操作，盡量在超凈工作臺(tái)內(nèi)操作。

3、離心步驟盡量在 4℃離心機(jī)上操作。

4、常規(guī)步驟與快速步驟的區(qū)別在于：常規(guī)步驟多了一步洗滌過程的離心，可以節(jié)省洗滌液的用量，并且洗滌效果也更好，不需要大體積的離心管；快速步驟少了一次離心過程，洗滌效果略差一些，同時(shí)需要大體積的離心管。

5、離心洗滌后，通常極微量的紅細(xì)胞不會(huì)影響后續(xù)的檢測(cè)。

6、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

Tris-氯化銨紅細(xì)胞裂解液