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信帆生物血清孕酮放免檢測試劑盒放免代測更省心!
更新時間:2019-08-28   點擊次數(shù):3481次

 信帆生物血清孕酮放免檢測試劑盒放免代測更省心!

 

孕酮是主要的孕激素,與雌激素協(xié)同作用,形成月事周期。測定血清孕酮是判斷女性性激素疾病的常用試驗,也可用于監(jiān)測婦女期胎盤的功能。[參考值]血清孕酮在女性一生中不同的時期,含量明顯不同;每日中也有一定波動,通常清晨高于下午,青春期這種差異更大,為便于比較,一般要求取血時間標準化。

 

簡介  

實驗開始前,請?zhí)崆芭渲煤盟性噭?,試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應(yīng)該做標準曲線。如樣品濃度過高時,用樣品稀釋液進行稀釋,以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。

1. 加樣:分別設(shè)空白孔、標準孔、待測樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。

為保證實驗結(jié)果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。

2.棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加生物素標記抗體工作液 100μl(取1μl生物素標記抗體加99μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內(nèi)配制),37℃,60分鐘。

3. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。

4.每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液(同生物素標記抗體工作液) 100μl,37℃,60分鐘。

5. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。

6. 依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。

7.依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準確性,底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。

8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行檢測。

 

妊烯醇酮氧化得到。將干燥的甲苯加入干燥的反應(yīng)鍋內(nèi),加入環(huán)已酮及妊烯醇酮,攪拌溶解,蒸甲苯脫水至盡,迅速加入異丙醇鋁,于115℃氧化反應(yīng)2h,冷卻至80℃左右,在攪拌下加入5%稀硫酸,靜置分層,分去水層,甲苯層用水洗至中性后進行水蒸氣蒸餾,蒸出甲苯及環(huán)已酮。冷卻,過濾,濾渣用石油醚攪成漿狀,過濾,以石油醚洗滌,干燥得黃ti酮粗品。粗品溶于乙醇,用活性炭脫色,重結(jié)晶成品,收率80%。

    

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