有人用過(guò)T細(xì)胞亞群試劑盒嗎，是由哪些試劑組成的？
T淋巴細(xì)胞亞群的檢測(cè)是細(xì)胞免疫檢測(cè)的新指標(biāo)之一。隨著抗T細(xì)胞單克隆抗體的問(wèn)世及各種檢測(cè)方法的建立。 T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)已經(jīng)在基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和醫(yī)學(xué)研究中得到廣泛應(yīng)用。
T淋巴細(xì)胞及其分類主要應(yīng)用抗T細(xì)胞表面抗原McAb.根據(jù)T淋巴細(xì)胞表面分化抗原將成熟T細(xì)胞分為CD4+、CD8-和CD4-、CD8+兩大亞群，T淋巴細(xì)胞的功能與表現(xiàn)型之間的對(duì)應(yīng)關(guān)系是相對(duì)的，其免疫活性可能受激活“微環(huán)境”的影響，并受MHC抗原的制約，許多研究證明，CD4+T細(xì)胞具有殺傷活性，介導(dǎo)Ι類抗原不相容時(shí)的靶細(xì)胞溶解。TU等研究表明，CD4+的細(xì)胞毒活性存在兩種*不同的機(jī)理，并證明TH1和TH2的細(xì)胞毒活性不同。前者強(qiáng)，后者弱或無(wú)活性。Dennert等發(fā)現(xiàn)，克隆化的T淋巴細(xì)胞具有輔助，細(xì)胞毒活性和遲發(fā)型超敏反應(yīng)作用，這種功能的多樣性有賴于所采用的分析方法。CD4+細(xì)胞識(shí)別Ⅱ類MHC抗原，其效應(yīng)的發(fā)揮也受Ⅱ類抗原的制約；CD8+細(xì)胞識(shí)別Ι類MHC抗原，發(fā)揮免疫效應(yīng)也受其控制。
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| T細(xì)胞亞群檢測(cè)試劑盒 標(biāo)本染色： | 1. 充分干燥（室溫2小時(shí)以上或過(guò)夜）的細(xì)胞涂片先用記號(hào)筆在標(biāo)本外畫圈，然后滴加固定液50μl，室溫靜置2-3分鐘，用PBS淋洗，擦干玻片背面及細(xì)胞外的PBS。 *以下反應(yīng)均需在濕盒中進(jìn)行。 2. 分別滴加抗人CD3、CD4、CD8單抗適量（10-30μl）， 4℃過(guò)夜，PBS淋洗3次。 3. 滴加生物素標(biāo)記抗小鼠IgG適量（10-30μl），37℃孵育30-45分鐘，PBS淋洗3次。 4. 滴加堿性酶標(biāo)記鏈霉卵白素適量（10-30μl）37℃孵育30-45分鐘，PBS淋洗3次。 5. 滴加顯色劑30-50μl，室溫顯色20-40分鐘。可在顯微鏡下觀察，待細(xì)胞膜上出現(xiàn)紅色標(biāo)記物時(shí)，用PBS淋洗。 6. 滴加細(xì)胞核復(fù)染液30-50μl，30秒后自來(lái)水淋洗。 7. 滴加封片劑，蓋片封片，鏡檢。如不需保存亦可用水替代封片劑蓋片鏡檢。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 標(biāo)本制備： | 取肝素抗凝（25μl/ml）的靜脈血1~2ml，PBS稀釋1-2倍后，沿裝有等量淋巴細(xì)胞分離液的試管壁混勻緩慢加至液面上層，保持兩種液體界面清晰，離心（2000轉(zhuǎn)/分）15-20分鐘，吸取兩液面交界處的單個(gè)核細(xì)胞層，加5倍PBS，離心（1000轉(zhuǎn)/分）5分鐘，棄上清液，沉淀即為單個(gè)核細(xì)胞。利用試管中剩余的少許回流液體（約一滴）混勻細(xì)胞，制成單個(gè)核細(xì)胞懸液。滴30μl細(xì)胞懸液于載玻片上，靜置2分鐘使細(xì)胞下沉粘附于玻片上，吸去液體，快速吹干或37℃溫箱1小時(shí)烤干?；蛴肞BS將單個(gè)核細(xì)胞調(diào)至2×105個(gè)/ml，離心涂片機(jī)1000轉(zhuǎn)離心1-2分鐘制片，快速吹干或37℃溫箱1小時(shí)烤干。涂片前取防脫片劑5-10μl均勻推片，亦可用棉簽粘取防脫片劑均勻涂于干凈玻片上，待干后制備細(xì)胞涂片，以防掉片。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 觀 察： | 高倍鏡下選取染色好的視野記數(shù)100-200個(gè)單個(gè)核細(xì)胞，細(xì)胞表面有紅色標(biāo)記物為陽(yáng)性細(xì)胞。算出陽(yáng)性率。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 正常參考值： | 正常人外周血中，陽(yáng)性細(xì)胞百分率一般在：CD3，60-80%；CD4，35-55%；CD8，20-30%；CD4/CD8的比值在1.5-2.0范圍內(nèi)。 |
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