腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)ELISA試劑盒簡(jiǎn)介
腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(brain-derived neurotrophic factor，BDNF)是1982年Barde等首先在豬腦中發(fā)現(xiàn)的一種具有神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)作用的蛋白質(zhì)。腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子及其受體在神經(jīng)系統(tǒng)廣泛表達(dá)。一種小分子二聚體蛋白質(zhì)BDNF結(jié)構(gòu)、分布及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)BDNF分子單體是由119個(gè)氨基酸殘基組成的分泌型成熟多肽，蛋白等電點(diǎn)為9.99,相對(duì)分子質(zhì)量為3.5×103,主要由β折疊和無(wú)規(guī)則卷曲二級(jí)結(jié)構(gòu)組成，含有3個(gè)二硫鍵，為一種堿性蛋白質(zhì)。BDNF分布在中樞神經(jīng)系統(tǒng)、周圍神經(jīng)系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)、骨和軟骨組織等廣泛區(qū)域內(nèi)，但主要是在中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)表達(dá)，其中海馬和皮質(zhì)的含量zui高。
腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)ELISA試劑盒的顯色與比色
顯色
顯色是ELISA試驗(yàn)中zui后一步溫育反應(yīng)，此時(shí)酶催化無(wú)色的底物生成有色的產(chǎn)物。反應(yīng)的溫度和時(shí)間仍是影響顯色的因素。適當(dāng)提高溫度，有助于加速顯色。在一定時(shí)間內(nèi)，陰性孔可保持無(wú)色，而陽(yáng)性孔則隨時(shí)間的延長(zhǎng)而呈色加強(qiáng)。在定量檢測(cè)中，加入底物后的反應(yīng)溫度和時(shí)間應(yīng)按規(guī)定力求準(zhǔn)確。ELISA顯色結(jié)果通過(guò)酶標(biāo)儀進(jìn)行，可減少實(shí)驗(yàn)誤差，提高臨界值樣本的分析準(zhǔn)確度。盡量避免肉眼直接判斷結(jié)果，因?yàn)椴煌瑐€(gè)體的視覺存在差異。應(yīng)注意，加顯色劑時(shí)，要保持顯色劑不外流。加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生較多氣泡，否則可能使假陽(yáng)性結(jié)果的出現(xiàn)概率增加。
比色
比色的方法有目視法和酶標(biāo)比色法2種。目視法簡(jiǎn)單明了，但對(duì)同一標(biāo)本，操作者的不同有時(shí)會(huì)出現(xiàn)不同的結(jié)果，具有一定的主觀性。比色的結(jié)果通常用光密度表達(dá)，現(xiàn)按規(guī)定用吸光度表達(dá)。酶標(biāo)儀不應(yīng)安置在陽(yáng)光或強(qiáng)光照射下，操作時(shí)的適宜室溫在15℃~30℃之間，使用前要先預(yù)熱儀器15~30min，使測(cè)得結(jié)果更為準(zhǔn)確。比色前，應(yīng)先用潔凈的吸水紙擦拭干凈板底附著的液體，然后將板正確放在酶標(biāo)比色儀的比色架上。綜上所述，的試劑，良好的儀器和正確的操作是ELISA檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確的必要條件。在實(shí)際應(yīng)用過(guò)程中，操作者必須熟練掌握基本操作技能，對(duì)每個(gè)環(huán)節(jié)進(jìn)行嚴(yán)格仔細(xì)的核查，盡量避免假陽(yáng)性和假陰性反應(yīng)的出現(xiàn)，檢測(cè)結(jié)果真實(shí)，為診斷和疾病防治提供的理論依據(jù)。
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