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 DAPI染色原理及使用說明

DAPI 是一種能夠與DNA強力結合的熒光染料。它結合到雙鏈DNA小溝的AT堿基對處，一個DAPI分子可以占據(jù)三個堿基對的位置。結合到雙鏈DNA上DAPI分子的熒光強度提高大約20倍，常用與熒光顯微鏡觀測，根據(jù)熒光的強度可以確定DNA的量。另外，因為DAPI可以透過細胞膜，它可以用于活細胞和固定細胞的染色。在熒光顯微鏡觀察下，DAPI染劑是利用紫外光波長的光線激發(fā)。單獨DAPI的大吸收波長為340nm，大發(fā)射波長為488nm；當DAPI與雙鏈DNA結合時，大吸收波長為364nm，大發(fā)射波長為454nm（10 mM Tris pH7.0，100 mM NaCl，10 mM EDTA），其發(fā)散光的波長范圍含蓋了藍色至青綠色。DAPI也可以和RNA結合，但產(chǎn)生的熒光強度只有與DNA結合的熒光強度的1/5，其發(fā)散光的波長范圍約在500nm左右。

使用說明（僅供參考）

1. 配制工作液：用雙蒸水或PBS稀釋母液，配制成所需要的工作的濃度（0.5-10 μg/mL），工作液可于4 ℃保存6個月。

2. 固定的細胞或組織染色：對于固定的細胞或組織樣品，固定后，適當洗滌去除固定劑。DAPI染色通常在其他染色的后進行。如果不需要進行其它染色，則直接進行DAPI 染色。

a）對于貼壁細胞或組織切片：加入適量DAPI染色液，覆蓋住樣品即可。

對于懸浮細胞：至少加入待測染色樣品體積3倍的染色液，混勻。室溫放置3-5分鐘。 

b）吸除DAPI染色液，用TBST、PBS或生理鹽水洗滌2-3次，每次3-5分鐘。

c）直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。激發(fā)波長360 nm，發(fā)射波長460 nm。

3. 活細胞或組織染色：

a）細胞培養(yǎng)物中加入適量DAPI染色液，約1/10細胞培養(yǎng)基體積，必須充分覆蓋住待染色的樣品。通常對于六孔板一個孔需加入1 mL染色液，對于96孔板一個孔需加入100 μL染色液。 

b）在 37 ℃培養(yǎng)細胞 10～20 分鐘。

c）用 PBS或合適的緩沖液洗細胞兩次。

d）直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。激發(fā)波長360 nm，發(fā)射波長460 nm。